Ann Hasseltine nació el 22 de diciembre de 1789 en Bradford, Massachusetts, hija de un diácono de iglesia. Trabajó como maestra desde su graduación hasta su matrimonio. En la adolescencia, según relatos de sus biógrafos, era una joven sociable y más dedicada a las diversiones locales que a la fe, hasta que, en 1806, una lectura sobre la vocación femenina la confrontó con la futilidad de esa vida y despertó en ella el deseo de una existencia dedicada a algo más grande que sí misma.
En 1810 conoció al joven misionero Adoniram Judson, quien le propuso no solo matrimonio, sino toda una vida en tierras lejanas, sin garantía de regreso. Ann tardó cerca de dos meses en decidirse, dividida entre el apego a su familia y el temor al sufrimiento; al aceptar, escribió en su diario que no le importaba dónde serviría, con tal de ser útil al reino de Dios.
Se casaron el 5 de febrero de 1812 y embarcaron pocos días después hacia la India. Durante la larga travesía, la pareja estudió el tema del bautismo y concluyó que la inmersión de los creyentes era el modelo bíblico, rompiendo con la junta que los había enviado y uniéndose a los bautistas; fueron bautizados en Calcuta.
Al no poder permanecer bajo dominio británico en la India, partieron hacia Birmania, llegando a Rangún en 1813. Ann aprendió el idioma local, abrió un espacio para enseñar a las niñas y escribió un catecismo que resumía la fe cristiana para los primeros oyentes birmanos.
La alegría de la maternidad vino acompañada de dolor: su hijo Roger nació en 1815 y murió antes de cumplir un año de vida. Aun así, Ann siguió estudiando idiomas y, en 1819, tradujo el Evangelio de Mateo al tailandés, la primera porción bíblica protestante en ese idioma, además de un catecismo impreso en caracteres tailandeses.
En 1822, problemas de salud la obligaron a regresar temporalmente a los Estados Unidos; fue en ese período que escribió un relato sobre la primera década de la misión bautista en Birmania, publicado en 1823. Ya recuperada, volvió a Asia al año siguiente.
En 1824, la guerra entre el Reino Unido y Birmania lo cambió todo: Adoniram fue apresado como supuesto espía y llevado a la prisión de Ava. Ann pasó a vivir en una cabaña cerca de los muros, llevando comida, ropa y súplicas a las autoridades, casi siempre sin respuesta; en sus propios relatos, describió haber llegado a momentos de profunda desesperación ante el hambre, la enfermedad y la incertidumbre sobre el destino de su esposo.
Fue en ese período que ayudó a esconder, dentro de una almohada, el manuscrito de la traducción del Nuevo Testamento que su esposo venía preparando desde hacía años; cuando los presos fueron trasladados y la almohada fue descartada, un sirviente de la familia la recuperó y la mantuvo enterrada hasta la liberación. Adoniram solo sería liberado en 1826, al final de la guerra.
Ya agotada por los meses de tensión y por la vida de privaciones, Ann murió el 24 de octubre de 1826 en Amherst, a los 36 años; los biógrafos difieren sobre la enfermedad exacta que la llevó a la muerte, atribuida unas veces a una fiebre contraída en la región, otras a complicaciones ligadas al desgaste físico de los años anteriores. Su hija menor, María, sobreviviría a su madre por pocos meses. Sus cartas, publicadas en los Estados Unidos, ayudaron a consolidar la imagen de la mujer misionera como vocación propia, y no solo como un papel de apoyo a su esposo.